現(xiàn)在,市面上的支原體清除劑大多是抗生素類的,主要是三種:四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和喹諾酮類。本文締一生物/締一生物為您分析如何真正有效的殺死支原體。
它們對支原體的清除作用主要是抑制,而非直接殺死支原體。因此它們的效果不能持久,還會產(chǎn)生支原體的耐藥和細(xì)胞毒。要想真正有效的殺死支原體,只有德國Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold產(chǎn)品。
Mynox®取自枯草桿菌發(fā)酵后的提取物。由于支原體沒有細(xì)胞壁,只有簡單的質(zhì)膜。Mynox®基于生物物理原理,只與支原體膜特異性結(jié)合,改變支原體膜的通透性,導(dǎo)致支原體破裂死亡,而哺乳動物細(xì)胞能迅速返回它的原來形態(tài),并保持正常的增殖速率。直至今日,Mynox®還沒有顯示任何導(dǎo)致正常細(xì)胞特性的改變。
注意:Mynox®用于清除細(xì)胞培養(yǎng)和病毒培養(yǎng)以及生物樣本中的支原體和無膽甾原體,于基礎(chǔ)研究使用。
下面,簡單介紹一下Mynox®及其用法:
Mynox®:無菌即用型,pH7.4,220µl/管,每管用1次
貨號#10-0200 2 管
貨號#10-0500 5 管
貨號#10-1000 10 管
2-8°C保存。室溫運(yùn)輸
建議采用DMEM或RPMI 1640培養(yǎng)基,5%FCS。如果清除病毒中的支原體,應(yīng)使用無血清培養(yǎng)基。如果是貼壁細(xì)胞,應(yīng)用胰酶消化,把細(xì)胞打散為單細(xì)胞,保證細(xì)胞與Mynox®充分接觸,從而更有效地殺除支原體。
Mynox®的細(xì)胞毒效應(yīng)在10%~80%,依賴于作用時間長短。通常能保證有充分存活的細(xì)胞應(yīng)用于繼續(xù)培養(yǎng)。支原體的高清除率帶來更高的細(xì)胞增殖速率,能夠彌補(bǔ)細(xì)胞毒帶來的損失。
Mynox®用法:
1、貼壁細(xì)胞
150px培養(yǎng)皿中,先后加2.8ml培養(yǎng)基(5%FCS),Mynox®200 µl,2 ml 細(xì)胞(1x104~1x105)。細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)2小時,即完成治療,即可換液。治療可持續(xù)3-8天,不過需注意觀察細(xì)胞狀態(tài)。
2、懸浮細(xì)胞
無菌離心管里先后加1.6ml 含0.125%胰酶和5mM EDTA PBS,Mynox®200 µl,1.6 ml細(xì)胞(細(xì)胞數(shù)1x104~ 1x105,10%FBS)。室溫孵育30分鐘即完成治療,即可將細(xì)胞離心換液。(注意:胰酶作用是防止細(xì)胞聚集。如不用胰酶解離細(xì)胞,可用培養(yǎng)基代替胰酶。要保證細(xì)胞與Mynox®混合物的總體積為3.4ml,必要時添加PBS。)治療也可持續(xù)3天,不過要觀察細(xì)胞狀態(tài)。
3. 無包膜病毒
1.5ml無菌離心管中加入1ml無血清培養(yǎng)基、100 µl Mynox®、125 µl病毒株和FBS(<8%)。輕輕搖勻,室溫培養(yǎng)2小時后即完成治療??捎门囵B(yǎng)基將Mynox®稀釋為1:10,終止反應(yīng)。注意:在病毒感染宿主細(xì)胞前,應(yīng)檢查宿主細(xì)胞系是否有支原體污染。
4、包膜病毒
注意:起始病毒滴度應(yīng)>106TCID50,以保證有足夠病毒能繼續(xù)進(jìn)行下游培養(yǎng)。
15ml無菌離心管中加入4.4ml無血清培養(yǎng)基、100µlMynox®、0.5ml病毒株和FCS(<8%)
混合物總體積為5 ml。輕輕搖勻,室溫培養(yǎng)30分鐘即完成治療。終止方法同上。注意:在病毒從細(xì)胞培養(yǎng)液中收集時,可多次使用這個支原體去除過程,以確保所有支原體已被清除。
支原體清除效果鑒定:
治療后細(xì)胞或病毒可正常傳代四次后再檢測。因?yàn)橹гw被殺死后,會釋放游離DNA到培養(yǎng)液中,此時檢測會有假陽性。推薦使用Minverva公司高敏感的Venor®Gem支原體PCR檢測試劑盒。
德國Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold產(chǎn)品為上海締一生物生物科技有限公司*代理。清除支原體的好產(chǎn)品選Mynox®。
綜上所述,您是不是已經(jīng)對如何真正有效的殺死支原體,有所了解。如果還有其他疑問,請咨詢締一生物/締一生物資深專家。