2017年,ISO發(fā)布了ISO 11290-1:2017,更新了李斯特菌的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)提供的方法針對(duì)的是2類,一類是單增李斯特菌,另一類是李斯特菌屬。樣品針對(duì)的是食品、飼料以及食品生產(chǎn)和加工的環(huán)境樣品。
ISO指出,李斯特菌常少量存在,且伴隨大量其他的微生物,因此選擇性增菌是必要的。并且有必要檢測(cè)受損傷或應(yīng)激狀態(tài)下的李斯特菌,因此增菌培養(yǎng)基應(yīng)減少抑制劑的用量。
ISO還提到,單增李斯特菌的存在可能被英諾克李斯特菌和伊氏李斯特菌所掩蓋。
ISO推薦的增菌培養(yǎng)基為半量Fraser肉湯,二次增菌為Fraser肉湯。ISO推薦的分離平板為兩種,一種為Ottaviani和Agosti推薦的李斯特菌平板。另一種可自我選擇,但應(yīng)為固體選擇性培養(yǎng)基,原理不同于種。在附錄E里,ISO列出了一些相關(guān)信息。
對(duì)于種,世界微生物產(chǎn)品開(kāi)發(fā)商HiMedia提供有Ottaviani和Agosti推薦的選擇性培養(yǎng)基,品名為L(zhǎng). mono Differential HiVegTM Agar Base(貨號(hào)為MV1540)(見(jiàn)下圖)。該ALOA李斯特菌顯色培養(yǎng)基不僅可以使李斯特菌旺盛生長(zhǎng),并鑒別不同李斯特菌物種(單增有光暈,英諾克光暈),而且抑制糞腸球菌、大腸埃希菌等雜菌生長(zhǎng)。
對(duì)于該培養(yǎng)基,ISO指出,一些處于應(yīng)激壓力(特別是酸應(yīng)激)下的單增李斯特菌菌株,可能會(huì)顯示特別弱的光暈,甚至沒(méi)有光暈。還有些罕見(jiàn)的單增李斯特菌,其 PIPLC活性慢,可能四天后才顯出光暈。還有些菌屬(非李斯特菌)的菌落為藍(lán)色,容易混淆,見(jiàn)附錄C。
對(duì)于李斯特菌的驗(yàn)證。ISO規(guī)定了四種試驗(yàn)應(yīng)必須開(kāi)展,即鏡下觀察、-溶血反應(yīng)、鼠李糖發(fā)酵、木糖發(fā)酵。還有一些可選的試驗(yàn),包括過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)和CAMP試驗(yàn)。以上試驗(yàn)中,單增李斯特菌均為陽(yáng)性。
在附錄E中,ISO列出了一些分離平板,包括PALCAM,Oxford培養(yǎng)基、改良型Oxford培養(yǎng)基、LPM瓊脂等,都可選擇。HiMedia也都提供這些培養(yǎng)基。
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