彎曲菌是一種常見的導致人類腸炎的致病菌,以腹瀉為主要特征,并可從糞便中分離出來。它污染食物和水,夏季是傳染高峰。
彎曲菌為革蘭陰性,螺旋形彎曲,有動力;培養(yǎng)時需3~15%氧,為微需氧菌;氧化酶陽性,還可還原性硝酸鹽。ISO于2017年發(fā)布了新版的ISO10272-1:2017標準,即《食品鏈的微生物學,彎曲菌屬檢測和計數(shù)的水平方法》,它取代的是舊版ISO 10272-1:2006。具體改變主要是:
1. 包括了二次增菌肉湯(Preston肉湯),主要為了克服背景菌對第三代-內酰胺類抗生素如頭孢哌酮的耐藥;
2. 增加了直接在mCCDA上的接種步驟;
3. 驗證試驗刪掉了微需氧生長,只規(guī)定了25℃需氧生長;
該ISO適用于食品、飼料和環(huán)境樣品。
ISO10272-1:2017建議的彎曲菌檢測方案,依據(jù)樣本類型和檢測目的,分為三種:1)在彎曲菌多的時候,不需要增菌,用方案C;2)對于彎曲菌和背景菌都較少的情況,用方案A,例如烹制過的或低溫食品。取樣后再Bolton肉湯微需氧37℃先培養(yǎng)4-6h,再41.5℃培養(yǎng)44h±4h;3)對于彎曲菌少,背景菌多的情況,例如生肉、生乳,采用方案B,在Preston肉湯中微需氧41.5℃培養(yǎng)24h±2h。
增菌后,方案A是采用mCCD瓊脂和另一款其選擇劑不同于mCCD的彎曲菌選擇分離培養(yǎng)基來分離,方案B是采用mCCD瓊脂來分離。均為微需氧41.5℃培養(yǎng)44h±4h。在mCCD瓊脂上彎曲菌典型菌落為灰色。對于ISO10272-1:2017中方案A所提到的另一款其選擇劑不同于mCCD的彎曲菌選擇分離培養(yǎng)基,可選擇HiMedia公司生產的HiCrome彎曲菌顯色培養(yǎng)基(貨號M2020,配合彎曲菌選擇性添加劑(貨號FD178)一起使用)。該顯色培養(yǎng)基含有復合蛋白胨、氯化鈉、多種顯色劑、生長因子和瓊脂。適用于食品樣本和臨床樣本。培養(yǎng)基配好為在平皿中為黃色透明至輕微不透明凝膠。35-37℃孵育24-48小時后,彎曲菌菌落為淡紫色(下圖),而金葡菌和大腸埃希菌均被抑制。
HiMedia公司是微生物產品生產商,一直致力于微生物培養(yǎng)基和細胞培養(yǎng)基的研發(fā)和生產,具有WHO GMP認證、ISO9001:2008,ISO13485:2003認證,CE認證和FDA注冊登記。其產品行銷140多個國家。
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